¿Qué son las bacterias Gram positivas y Gram negativas? Es una pregunta fundamental en microbiología.
Preparación de la muestra
Primero, necesitas una muestra de bacterias. Puedes obtenerla de un cultivo en una placa de Petri.
Luego, fija las bacterias en un portaobjetos. El calor es un método común. Esto asegura que las bacterias no se laven durante el proceso.
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Finalmente, deja que el portaobjetos se enfríe antes de continuar.
Tinción con cristal violeta
Cubre la muestra con cristal violeta. Este es el primer colorante que se utiliza.
Deja que el cristal violeta actúe durante un minuto. El cristal violeta coloreará todas las células bacterianas.
Enjuaga el portaobjetos suavemente con agua. El agua eliminará el exceso de cristal violeta.
Aplicación de yodo
Ahora, agrega yodo. El yodo actúa como un mordiente.
Deja que el yodo actúe durante un minuto. El yodo forma un complejo con el cristal violeta dentro de la célula.
Enjuaga el portaobjetos con agua. Elimina el yodo no fijado.
Decoloración con alcohol
Este es el paso crucial. Agrega un decolorante, como alcohol o acetona.
Hazlo con cuidado. Agrega el decolorante gota a gota hasta que no salga más color del portaobjetos. Normalmente toma pocos segundos.
Enjuaga inmediatamente con agua. Detén la acción del decolorante.
Contratinción con safranina
Aplica safranina. La safranina es un colorante de contraste.
Deja que la safranina actúe durante un minuto. La safranina teñirá las células que perdieron el cristal violeta.
Enjuaga con agua. Seca el portaobjetos suavemente.
Observación al microscopio
Observa el portaobjetos bajo un microscopio. Utiliza un objetivo de inmersión en aceite para obtener la mejor resolución.
Las bacterias Gram positivas aparecerán de color púrpura o azul. Retuvieron el cristal violeta.
Las bacterias Gram negativas aparecerán de color rosa o rojo. Perdieron el cristal violeta y fueron teñidas por la safranina.
¿Por qué ocurre esto?
La diferencia clave está en la estructura de la pared celular. Las bacterias Gram positivas tienen una pared celular gruesa de peptidoglicano.
Esta pared gruesa retiene el complejo cristal violeta-yodo. El alcohol deshidrata y encoge la pared, atrapando el colorante.
Las bacterias Gram negativas tienen una pared celular más delgada de peptidoglicano. Además, tienen una membrana externa.
El alcohol disuelve la membrana externa. El complejo cristal violeta-yodo se elimina fácilmente. La safranina luego tiñe la célula.
Ejemplos
Ejemplos de bacterias Gram positivas incluyen Staphylococcus y Streptococcus.
Ejemplos de bacterias Gram negativas incluyen Escherichia coli (E. coli) y Salmonella.
La tinción de Gram es una herramienta valiosa. Ayuda a identificar y clasificar las bacterias.
