El principio fundamental detrás de la determinación de glucosa en sangre se basa en reacciones enzimáticas que convierten la glucosa en productos medibles.
Paso 1: Obtención de la muestra de sangre
Primero, necesitas una muestra de sangre. Esto generalmente se obtiene mediante una punción en el dedo (muestra capilar) o una extracción de sangre venosa (muestra venosa). Asegúrate de seguir los protocolos de seguridad adecuados para evitar la contaminación y protegerte a ti mismo y al paciente. Usa guantes siempre.
Para una muestra capilar, limpia el dedo con alcohol isopropílico al 70% y deja que se seque al aire. Luego, usa una lanceta estéril para hacer una pequeña punción. La primera gota de sangre debe limpiarse con una gasa estéril, ya que puede estar diluida con líquido tisular. Recoge la segunda gota para la prueba.
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Si se usa una muestra venosa, un profesional de la salud extraerá sangre de una vena utilizando una aguja y una jeringa o un sistema de recolección al vacío. La sangre se recoge en un tubo que puede contener o no anticoagulantes, dependiendo del tipo de análisis que se vaya a realizar.
Paso 2: Reacción Enzimática
El método más común usa las enzimas glucosa oxidasa (GOD) y peroxidasa (POD). La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la glucosa en ácido glucónico y peróxido de hidrógeno (H2O2).
La reacción es: Glucosa + O2 --(GOD)--> Ácido Glucónico + H2O2. El oxígeno (O2) es necesario para esta reacción. La glucosa oxidasa es muy específica para la glucosa, minimizando la interferencia de otras sustancias en la sangre.
El peróxido de hidrógeno producido en la primera reacción se utiliza en una segunda reacción catalizada por la peroxidasa. La peroxidasa cataliza la oxidación de un cromógeno (una sustancia incolora) en un compuesto coloreado. Este cambio de color es directamente proporcional a la cantidad de glucosa presente en la muestra.
La reacción es: H2O2 + Cromógeno reducido --(POD)--> Cromógeno oxidado (colorido) + H2O. El cromógeno oxidado es la sustancia coloreada que se mide.
Paso 3: Medición Colorimétrica
La intensidad del color producido es medida por un espectrofotómetro a una longitud de onda específica. El espectrofotómetro mide la absorbancia de la solución, que es la cantidad de luz que absorbe la solución coloreada.
Cuanto mayor sea la concentración de glucosa en la muestra, mayor será la cantidad de peróxido de hidrógeno producido, mayor será la cantidad de cromógeno oxidado (colorido) y mayor será la absorbancia medida por el espectrofotómetro. La absorbancia es directamente proporcional a la concentración de glucosa según la Ley de Beer-Lambert.
Un espectrofotómetro emite un haz de luz a través de la muestra y mide cuánta luz pasa a través de ella. La absorbancia (A) se calcula como A = -log (T), donde T es la transmitancia (la fracción de luz que pasa a través de la muestra). La absorbancia se compara luego con una curva de calibración, que es una gráfica que relaciona la absorbancia con concentraciones conocidas de glucosa.
Paso 4: Cálculo de la Concentración de Glucosa
La absorbancia obtenida de la muestra se compara con una curva de calibración previamente establecida utilizando soluciones de glucosa de concentración conocida. La curva de calibración permite determinar la concentración de glucosa en la muestra desconocida.
La curva de calibración se genera midiendo la absorbancia de varias soluciones de glucosa de concentración conocida y graficando la absorbancia versus la concentración. Esta gráfica proporciona una relación directa entre la absorbancia y la concentración de glucosa. Para determinar la concentración de glucosa en una muestra desconocida, se mide su absorbancia y se localiza el valor correspondiente en la curva de calibración.
Alternativamente, muchos analizadores automáticos realizan este cálculo internamente utilizando algoritmos preprogramados. Estos algoritmos están basados en la Ley de Beer-Lambert y en la curva de calibración que ha sido previamente introducida en el sistema. El resultado se muestra directamente en la pantalla del analizador.
