Identificar bacterias en un laboratorio es como resolver un misterio. Usamos varias pistas, llamadas pruebas bioquímicas, para descubrir qué bacteria tenemos. Estas pruebas observan cómo las bacterias interactúan con diferentes sustancias químicas.
Preparación de la muestra
Primero, necesitamos una muestra pura de la bacteria. Tomamos una colonia aislada de la placa de Petri. La suspendemos en un medio líquido estéril, como solución salina.
Esto crea una suspensión uniforme de bacterias. Esta suspensión será nuestra muestra para las pruebas.
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Prueba de la Catalasa
La prueba de la catalasa detecta la presencia de la enzima catalasa. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.
Colocamos una gota de peróxido de hidrógeno (H2O2) sobre un portaobjetos. Añadimos una pequeña cantidad de la muestra bacteriana a la gota. Observamos si hay burbujas.
La formación de burbujas indica una prueba positiva. Esto significa que la bacteria produce catalasa. Por ejemplo, los Staphylococcus son catalasa positivos.
Prueba de la Oxidasa
La prueba de la oxidasa determina si la bacteria produce la enzima citocromo oxidasa. Esta enzima participa en la cadena de transporte de electrones.
Frotamos una colonia de la bacteria sobre un papel de filtro especial. Este papel ha sido impregnado con un reactivo de oxidasa.
Observamos si el papel cambia de color a púrpura o azul oscuro en pocos segundos. Un cambio de color indica una prueba positiva. Por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa es oxidasa positiva.
Prueba de la Coagulasa
La prueba de la coagulasa detecta la presencia de la enzima coagulasa. La coagulasa causa la coagulación del plasma sanguíneo.
Mezclamos una pequeña cantidad de la muestra bacteriana con plasma de conejo. Incubamos la mezcla a 37°C durante varias horas.
Observamos si hay coagulación o formación de un coágulo. La coagulación indica una prueba positiva. Por ejemplo, Staphylococcus aureus es coagulasa positivo.
Pruebas de Fermentación de Azúcares
Estas pruebas determinan si una bacteria puede fermentar un azúcar específico. Los azúcares comunes incluyen glucosa, lactosa y sacarosa.
Inoculamos un tubo de ensayo con un medio que contiene el azúcar en cuestión. El medio también contiene un indicador de pH, como rojo de fenol. Además, un tubo de Durham invertido captura cualquier gas producido.
Incubamos el tubo y observamos el cambio de color del indicador. Un cambio a amarillo indica que se ha producido ácido por la fermentación. La presencia de gas en el tubo de Durham confirma la producción de gas.
Por ejemplo, Escherichia coli fermenta la lactosa con producción de gas.
Prueba de Indol
La prueba de indol detecta si una bacteria puede degradar el triptófano en indol. El indol se detecta mediante el reactivo de Kovac.
Inoculamos un medio de caldo de triptófano con la bacteria. Después de la incubación, añadimos unas gotas del reactivo de Kovac.
Observamos si se forma un anillo rojo en la parte superior del medio. La formación de un anillo rojo indica una prueba positiva. Por ejemplo, algunas cepas de E. coli son indol positivas.
Prueba de Rojo de Metilo (RM) y Voges-Proskauer (VP)
Estas dos pruebas se realizan juntas para diferenciar entre bacterias. Se realizan en el mismo medio, caldo RM-VP.
Después de la incubación, dividimos el caldo en dos tubos. Añadimos unas gotas de rojo de metilo a un tubo. Un color rojo indica una prueba de RM positiva, lo que significa que se ha producido una gran cantidad de ácido.
Al otro tubo, añadimos reactivos de VP (alfa-naftol y KOH). Un color rojo o rosado indica una prueba de VP positiva, lo que significa que se ha producido acetoína. E. coli es RM positiva y VP negativa.
Cada prueba nos da una pieza del rompecabezas. Combinando los resultados de varias pruebas, podemos identificar la bacteria.
